原标题：组织细胞消融-核酸提取方法、纯化及相关应用场景
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组织细胞消融-核酸提取方法、纯化及相关应用场景
1.1
概述
核酸是由许多核酸聚合成的生物大分子化合物，为生命的最基本物质之一。核酸广泛存在所有动物、植物细胞、微生物内、生物体内核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。不同的核酸，化学组成、核酸排列顺序不同。根据化学组成不同，核酸可分为核糖核酸，简称RNA和脱氧核糖核酸，简称DNA。
DNA是储存、复制和传递遗传信息的主要物质基础，RNA在蛋白质合成过程中起着重要作用，其中转运核糖核酸，简称tRNA,起着携带和转移活化氨基酸的作用：mRNA是合成蛋白质的模板；核糖体的核糖核酸，简称rRNA,是细胞合成蛋白质的主要场所。
1.2
核酸提取样品
普通样品：血液、动植物组织、细菌、细胞、病毒、髓、体液等等。
疑难样品：唾液、痰液、土壤、粪便、头发、石蜡包埋组织、骨骼、牙齿、指甲、烟头等等
1.3
核酸提取的方法
核酸包括DNA、RNA两种分子，在细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在，核酸提取的主要步骤为：裂解细胞去除与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂类等生物大分子，去除其他不需要的核酸分子，如提取DNA分子时，应去除RNA，反之亦然。沉淀核酸纯化核酸，去除盐类，有机剂等杂质。
1.3.1碱裂解法
碱裂解法是基于DNA的变性与复性差异而达到分离目的。
1.3.2.煮沸法
煮沸时将样品中的DNA通过核酸裂解液的作用释放出来，离心沉淀后将杂质去除，上清液即可用作PCR扩增。
1.3.3浓盐法
利用RNA和DNA在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M氯化纳提取，得到的DNP粘液与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡，使乳化，再离心除去蛋白质，此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中，用2倍体积95%%u4E59醇可将DNA钠盐沉淀出来。
1.3.4苯酚抽提法
苯酚作为蛋白变性剂，同时抑制了DNase的降解作用，用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA。此时DNA是十分粘稠的物质，可用玻璃慢慢绕成一团，取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态。
1.3.5水抽提法
利用核酸溶解于水的性质，将组织细胞破碎后，用低盐溶液除去RNA,然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中，离心后收集上清液，在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%醇，立即用搅拌法搅出，然后分别用66%,80%和95%乙醇以及丙铜洗涤，最后在空气中干燥，即得DNA样品，此法提取的DNA中蛋白质含量较高，故一般不用，为除蛋白可将此法加以改良，在提取过程中加入SDS。
1.3.6阴离子去污剂法
用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性，可以直接从生物材料中提取DNA。由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合，因为阴离子去污剂能够破坏这种价键，所以常用阴离子去污剂提取DNA。
1.3.7硅胶膜法
可用于手工提取，也可用于自动化提取。
硅胶模法核酸提取
1.3.8磁珠法
一般用于自动化提取，生物磁珠是一种新型的功能化固体载体，其表面包被有活性基团，可以与多种生物活性物质发生偶联，兼具有液体的流动性和固体磁性材料等特点，在外磁场的作用下可以定向移动和栠中，当撤去外磁场后，稍加振荡或抽吸又可均匀分散于液体中，从而使固液相的分离变的十分快捷方便，通过简单的洗脱可以得到纯度很高的靶向物质。
