一例异常CA19-9的循检追踪及防范措施

作者    

     恩泽医院检验科    王冬莲、赵静娴 、孙彤编辑    

     贾鹏强

01疑案介绍一位本院员工3月22日CA19-9健康体检结果为2062.9 U/mL，其余肿瘤标志物均正常（见图1），3月23日重抽复查为2079.3 U/mL。图1  3月22日CA19-9检测结果我们知道，糖类抗原19-9（Carbohydrateantigen19-9，CA19-9）是一种糖蛋白，胚胎期分布于胎儿胰腺、胆囊、肝、肠等处。正常人胰腺、胆管等部位也会分泌少量的CA19-9。CA19-9是一种常见的肿瘤标志物，是对胰腺癌敏感性最高的肿瘤标志物之一。CA19-9的显著升高还见于胆管癌、结直肠癌等以及某些胆汁淤积患者。在消化道肿瘤的诊断、治疗、疾病进展监测、预后判断方面有较大的临床应用价值。由于CA19-9结果异常高，该员工担心自己的身体状况可能出现问题，前往上级医院进行CA19-9、CT、MR、胃肠镜辅助检查。上级医院CA19-9检测结果为6.7 U/mL。CT、MR、胃肠镜检查报告无明显异常。

02寻踪觅源为什么两家医院CA19-9检测结果天差地别？为什么本院CA19-9检测结果与员工的影像学检查结果不符？我们有必要对该异常CA19-9结果进行寻踪觅源。我们又将该标本送附近兄弟医院单位检测，检测结果为22.3 U/mL。三个检测系统CA19-9的检测结果及参考区间（见表1）。表1  三个检测系统CA19-9的检测结果及参考区间

我们对整个检验过程进行梳理。该员工两天检测结果接近，质控均在控，排除了随机误差。标本无溶血、黄疸、脂浊，排除了分析前的干扰。仪器压力感应、液面感应、清洗状态均正常，排除了仪器硬件因素。查看试剂说明书提供的检测方法局限性：a：人血清中的嗜异性抗体可以与试剂免疫球蛋白发生反应干扰体外免疫检测，经常与动物或者动物血清产品接触的患者，其样本可能容易受到此干扰，并使检测结果出现异常值；b：使用小鼠单克隆抗体制剂进行诊断或者治疗的患者，其样本中可能含有人抗小鼠抗体（HAMA）。当使用含有小鼠单克隆抗体的试剂盒检测含有HAMA样本时，检测值可能会假性升高或者降低。根据检测说明书提示的方法局限性，我们考虑内源性抗体干扰的可能性很大，为了验证这一推测，我们主要从以下几个方面进行验证：（1）用样本稀释液对样本进行倍比稀释检测，结果呈线性（见图2）。

图2  CA19-9稀释结果验证内源性干扰抗体与目标抗原结合能力较弱，稀释后结果一般呈非线性变化。但该员工血清稀释后CA19-9结果呈线性变化（斜率1.0404，R2=0.9993）。但也不能排除内源性抗体的结合能力强，亲和力不随稀释而变化，需要进一步验证。(2)聚乙二醇（PEG）沉淀实验，回收率＜1%，而对照血清和质控品回收率＞95%（见表2），考虑该员工体内存在大分子蛋白质的干扰，干扰本实验室平台CA19-9的检测。

表2  CA19-9 PEG沉淀实验验证

（3）我们又将该标本送“检测系统A平台诊断中心”进一步查找哪种大分子蛋白质干扰CA19-9的检测。

03检测系统A平台诊断中心排查结果解释（1）用鼠抗嗜异性抗体阻断管（HBT）法封闭血清中的鼠抗嗜异性抗体后，血清CA19-9检测结果为19.28 U/ml，说明该员工体内存在大分子蛋白质的干扰为鼠抗嗜异性抗体；

（2）标本10倍稀释，然后与500Mu/mL唾液酸苷酶处理液1:1混合，唾液酸苷酶能裂解血清真正的CA19-9，检测的假性CA19-9结果为2116.8 U/ml；（3）加0Mu/mL唾液酸苷酶裂解，不能裂解血清真CA19-9，检测总的CA19-9结果2266IU/ml。那真正的CA19-9为49.2 U/ml。

04凶手现形原来是患者体内鼠抗嗜异性抗体干扰造成的，那为什么鼠抗嗜异性抗体仅干扰本实验室的检测系统？本实验室的CA19-9检测试剂含有鼠抗包被的微粒子和标记的鼠抗结合物，人抗小鼠抗体（HAMA）可桥接试剂的鼠抗包被的微粒子和标记的鼠抗结合物，导致CA19-9结果假性升高。另外两家检测系统不是鼠抗包被的微粒子，不会与该标本的HAMA结合。

05知识拓展发光免疫测定法敏感性高、特异性好，但仍然无法完全避免干扰的产生。尤其是近些年免疫治疗（单克隆抗体）的迅速发展，以及城市中饲养宠物的人员增多，及养生保健品服用的增多，嗜异性抗体、抗动物抗体、生物素或自身抗体等循环内原性抗体干扰越来越多。最常见的干扰是嗜异性抗体与免疫分析试剂的异源抗体结合，影响各种检测，对夹心法免疫检测影响最大。夹心法免疫检测至少使用两种对抗原不同表位的抗体，包括包被固相的捕获抗体及游离在液体中的标记抗体。正常情况下，样本中的抗原连接两种抗体，标记抗体结合到固相的量与样本中的抗原浓度成正比。然而嗜异性抗体也可以桥连两种抗体，使得结合到固相的标记抗体浓度升高，造成检测结果假性升高。个别干扰抗体也可借助空间位阻阻遏抗原与抗体的特异性反应，导致检测结果假性降低，干扰抗体造成检测结果假性升高或者降低反应机理（见图3）。另有研究表明嗜异性抗体干扰机制可能是嗜异性抗体与检测试剂抗体的Fc表位或者Fab区域中的抗原决定簇结合，干扰夹心法和竞争法的免疫检测。总之，干扰物质会导致检测结果假性升高或者假性降低，造成临床误诊或者漏诊，导致患者不必要的医疗费用和心理负担。 

图3  干扰抗体反应机理

06改进措施回顾该案例，虽然我们后期及时对该员工异常的CA19-9结果进行寻踪觅源，排除了肿瘤疾病，但前期还是给该员工带来了巨大的心理负担。为了更早地识别免疫检测中的干扰，避免类似情况发生，我们从以下几个方面进行了改进：（1）对检验人员进行《检验常见干扰因素及复查流程》培训，同时要求大家熟悉各个检测平台，哪些检测平台易受嗜异性抗体干扰、哪些检测平台易受生物素干扰等。报告审核时发现检验结果与临床诊断、项目关联性、历史数据及影像学诊断不符时，及时抗干扰处理或者另外检测平台复查。同时主动联系患者有无进行免疫制剂治疗或者服用特殊药物，或者饲养宠物等因素导致结果无法解释。（2）针对“不同免疫检测平台检测结果不一致”问题。实验室免疫检测报告单，已按照卫生行业要求标识“检测项目的检测方法与检测平台”，同时报告系统增加“不同检测系统，可能导致检测结果差异，因此不能通用”的备注。（3）易受内源性抗体干扰的常见免疫项目（AFP、CEA、CA19-9、CA50、CA724、CA242、FPSA、TT4等）检测结果＞参考区间上限1.5倍，系统设置自动预警，并弹框提醒：    （a）首次且单个检测结果异常，并与临床诊断或者关联项目不符时，及时联系临床或询问病人临床症状、病史及用药情况等。   （b）使用嗜异性抗体阻断剂（HBT）法或者PEG处理后复查标本，或者使用其他平台仪器复查标本（见图4）。

 图4  异常结果自动弹框提醒复查

（4）完善免疫检测结果复查流程及复查后结果上报流程。复查结果回收率≤50%，报告复查结果，报告单备注：嗜异性抗体筛查：阳性（见图5）。如该患者下次复查，则系统自动弹框提醒：嗜异性抗体（阳性）。复查结果回收率＞50%，报告原始结果。回收率=抗干扰处理后复测结果/原始检测结果 *100%

图5 系统备注（嗜异性抗体筛查：阳性）

07改进成效落实上述改进措施后，又及时发现1例5189.4IU/mL的异常CA19-9检测结果是由于内源性干扰引起的，经抗干扰处理后，CA19-9及CA125均正常了（见图6），有效避免了内源性抗体干扰引起的错误结果。

图6：干扰导致异常CA19-9、CA125结果

文章来源：妙毕生化，若有侵权，请联系本站删除！